クロルヘキシジンは何%を何秒？——抜去歯の実験室研究で、エッチング後にCHXで湿らせ直した群は、試したどの濃度（0.002〜4%）・時間（15秒・60秒）でも6か月後の接着強さに有意な低下を検出しなかった。水の群は有意に低下した（Loguercio 2009）

①クロルヘキシジンは、何%を何秒塗れば足りる？

エッチング後の象牙質にクロルヘキシジン（CHX）を塗っておくと、樹脂と象牙質の接着が時間とともに弱くなるのを抑えられる――そう報告した先行研究は、2%のCHXを60秒という条件で調べていました。でも、チェアサイドで60秒は長い。濃度も、もっと薄くてよいのではないか。

この「濃度」と「塗る時間」を、抜去歯で正面から比べたのが、ブラジル・ポンタグロッサ州立大学の Loguercio・Stanislawczuk・Polli・Costa・Michel・Reis が2009年に European Journal of Oral Sciences に出した論文です。

②なぜこの研究が必要だったか

エッチ＆リンス方式では、リン酸で脱灰したコラーゲンの網に樹脂を染み込ませて樹脂含浸層を作ります。著者らは序論で、樹脂が染み込みきらずにむき出しのコラーゲンが残ると、そこが水による分解を受け、象牙質に含まれるマトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）というたんぱく分解酵素もコラーゲンの分解に関わる、という先行研究を引いています。

そのMMPを抑える薬としてCHXが注目され、先行研究では2%のCHXを60秒塗ると接着の劣化が遅れたと報告されていました。一方で著者らは、60秒の処置はチェアタイムを延ばし、手順を簡単にしたい臨床の要望とぶつかると指摘します。また、別の研究では、ごく低い濃度（0.0001〜0.02%）のCHXでも精製したMMPの働きが抑えられ、一方で0.01%前後のCHXでも培養した細胞に強い毒性を示したとの報告もあることを引き、「低い濃度・短い時間で足りるか」を確かめる必要がある、としました。

著者らの仮説は、「いちばん低い濃度のCHXを15秒塗るだけで、6か月の水中保管後の接着強さの低下と、接着層・樹脂含浸層への銀の染み込みの増加を防げる」というものです。

③何をどう調べたか

・歯：う蝕のない抜去ヒト第三大臼歯120本（実験1に60本、実験2に60本）。咬合面のエナメル質を削って平らな象牙質を出し、600番の耐水研磨紙で60秒研磨した
・接着材：エッチ＆リンス方式の2ステップの2種。Adper Single Bond（3M ESPE。エタノールと水が溶媒）と Prime & Bond 2.1（Dentsply。アセトンが溶媒）。それぞれ付属のリン酸で15秒エッチング、15秒水洗、30秒エアで乾かした
・湿らせ直し（ここが比べた条件）：乾かした象牙質を、水（対照）かCHX（クロルヘキシジングルコン酸塩）の水溶液で湿らせ直した。実験1は水・0.002%・0.02%・0.2%・2%・4%を60秒。実験2は水・0.002%・2%を15秒か60秒
・その後：メーカーの指示どおりに接着材を塗って光重合し、コンポジットレジンを築盛。24時間後に棒状の試料（断面積 約0.8mm²）に切り分け、同じ歯の試料を「直後に測る」と「37℃の水に6か月置いてから測る」に分けた（保管の水は交換せず）
・測ったもの：①微小引張接着強さ（0.5mm/分で引っぱる）②銀の染み込み：試料をアンモニア性硝酸銀に24時間浸し、電子顕微鏡の画像で、接着層と樹脂含浸層の面積のうち銀が沈着した面積の割合（%）を測った。数値が大きいほど、界面の隙間が多いと読む
・規模：各実験とも接着材2種×条件6つ＝12群で、各群の歯5本。統計の単位は「歯の半分」（直後と6か月後に半分ずつ）。試料作製中に外れた試料は約5MPaとして平均に含めた
・統計：接着材ごとに反復測定の分散分析（実験1は二元配置、実験2は三元配置）とTukeyの検定

④結果1：濃度2つ×時間2つ。15秒でも60秒でも、CHXの群は6か月後に有意な低下を検出しなかった

まず、この論文の主題である実験2です。水・0.002%・2%を、15秒か60秒塗りました。

Adper Single Bond では、水の群は直後39.2・41.5MPa から6か月後27.9・25.4MPa へ有意に下がりました。CHXの4群は6か月後も37.2〜40.1MPa で、直後との間に有意差を検出せず、6か月後の値はどれも水の群より有意に高い結果でした。

Prime & Bond 2.1 でも、水の群は28.3・32.4MPa から20.1・21.2MPa へ有意に下がりました。CHXの群は直後から6か月後への有意な低下を検出しませんでしたが、6か月後の値が水の群より有意に高かったのは「2%・60秒」（28.1MPa）だけで、0.002%の2群と2%・15秒の6か月後の値（23.2〜27.3MPa）は、原著の表で水の群とも有意差を認めない中間の値でした。

三元配置の分散分析で有意だったのは「濃度×保管期間」の組み合わせだけで、塗る時間（15秒か60秒か）の影響は有意として検出されませんでした。

⑤結果2：濃度5段階。濃くすれば良いわけではなかった

実験1では、60秒に固定して濃度を0.002%から4%まで5段階に変えました。

水の群は、どちらの接着材でも6か月後に有意に下がりました。CHXの群は、どの濃度でも直後から6か月後への有意な低下を検出しませんでした。ただし4%は直後の平均が6条件の中で最も低く（Adper Single Bond 26.3MPa、Prime & Bond 2.1 26.7MPa。直後の時点でほかの条件との有意差はなし）、6か月後の値は水の群の6か月後と同じ文字（有意差なし）でした。また、6か月後に水の群より有意に高かった濃度は、Adper Single Bond では0.002%・0.2%・2%、Prime & Bond 2.1 では0.02%・0.2%・2%で、接着材によって違いました。

⑥結果3：銀の染み込みは、CHXでも6か月で増えたが、水より少なかった

実験2では、直後の時点で、CHXの群は濃度にかかわらず水の群より銀の染み込みが少なく（CHXの4群＝0.002%・2%×15秒・60秒の平均は、接着材2種を通して9.8〜12.6%。水の2群は18.3〜28.7%。原著の表7から筆者が最小〜最大を拾った）、6か月後にはすべての群で有意に増えました。ただし6か月後の値は、どのCHXの群も水の群より有意に低く、CHXの4群21.3〜26.7%、水の2群39.5〜45.3%でした（直後からの増え幅そのものは、CHXの群のほうが大きい条件もありました）（同じく接着材2種を通した最小〜最大）。実験1でも同じ傾向で、CHXの中では4%が6か月後にいちばん多く（Prime & Bond 2.1 32.4%、Adper Single Bond 27.4%）、原著の本文はより低い濃度と有意に違ったと書いています（表では0.002〜0.2%と異なる文字、2%とは共通の文字）。

⑦結果の読み方：薄くても短くても有意な低下を検出しなかったのはなぜか（著者らの考え）

著者らは、CHXの効果が濃度によらなかった点を、別の研究で精製したMMP-2・MMP-8・MMP-9がごく低い濃度のCHXで抑えられたという報告と一致する、と考察しています。15秒でも足りた理由としては、CHXが表面に吸着して長くとどまる性質（サブスタンティビティ）があり、脱灰したコラーゲンにも速く結びつくのではないか、という仮説を挙げています。

ただし、この研究はMMPの働きそのものや、CHXがコラーゲンに結びついたかどうかは測っていません。測ったのは接着強さと銀の染み込みで、「MMPを抑えたから保たれた」は著者らの解釈です。また著者らは、0.002%は歯根膜の細胞や象牙芽細胞様の細胞に毒性を示さないとする別の研究を引き、窩洞の清掃剤としての可能性を挙げていますが、毒性はこの研究では調べていません。

結論として著者らは、「この研究の実験室の条件では、低い濃度のCHXを15秒塗るだけで、少なくとも6か月は象牙質の接着を保てる」とし、長期の機能のもとで保てるかは臨床研究で確かめる必要がある、と書いています。

⑧明日の臨床へ

この研究から持ち帰れるのは、次のような読み方です（筆者の読み）。

手順としては、エッチング・水洗・乾燥のあと、水の代わりにCHX水溶液で湿らせ直してから接着材を塗る、という流れです。ただし調べたのは抜去歯で、37℃の水に6か月置いたあとの値まで。修復物の長持ちや二次う蝕などの臨床成績は調べていません。「CHXを使うなら、塗る時間は先行研究の60秒にこだわらなくてよいかもしれない。濃度をどこまで下げられるかは、まだ言い切れない」という程度に受け取るのが、この論文に合った読み方です。