根管洗浄の次亜塩素酸ナトリウム、2%と6%で違う？何分当てれば足りる？——ヒトの抜去歯の象牙質片の象牙細管に1種類の菌を入れた実験室研究で、6%次亜はどの時間でも2%次亜と2%クロルヘキシジンより有意に多くの菌を死なせ、死んだ菌の割合の増え方は10分を過ぎるとわずかで、6%次亜を30分当てても全部は死ななかった（Du 2014）

①次亜塩素酸ナトリウム、2%と6%で違う？何分当てれば足りる？

根管洗浄の次亜塩素酸ナトリウム（以下、次亜）。濃度は何%にするか、どれくらいの時間、液を当て続けるか。象牙細管の奥に入りこんだ菌まで届かせたいと思うほど、迷うところです。

この2つ、濃度と時間を、象牙細管に菌を入れた同じ実験の型で比べたのが、Du・Haapasalo らが2014年に Journal of Endodontics に出した研究です。

②なぜこの研究が必要だったか

象牙質は象牙細管のある多孔質の組織で、細管の中に入りこんだ菌は、根管の中の洗浄液や貼薬から守られやすい、と著者らは引用文献をもとに書いています。エンテロコッカス・フェカーリスは、根管治療後も根尖病変が残る歯からよく見つかる菌で、象牙細管に入りこみ、菌の層（バイオフィルム）を作ることが、洗浄液や貼薬への強さにつながるとされています。

同じ研究グループは、遠心で菌を象牙細管に詰めこみ、生きた菌と死んだ菌を色で染め分けて顕微鏡で数える実験の型を作っていました。ただ、その型を使ったこれまでの研究は1分・3分と短い時間だけで、6%次亜でも死んだ菌は1分で35%、3分で61%にとどまっていました（引用された研究）。もっと長く当てれば、もっと死ぬのか。そこを3分・10分・30分で確かめたのが今回の研究です。

③何をどう比べたか

・試料：矯正のために抜いた、むし歯の無い単根のヒトの歯24本。根の象牙質を長さ4mmの筒に切り、根管を1.5mmに広げてから縦に2つに割り、48個の半円柱の片（約4×4×2mm）にした。スミヤー層は5.25%次亜と6%クエン酸の超音波洗浄で除いた
・菌：エンテロコッカス・フェカーリス（VP3-181株）の液を、片ごと遠心（毎分5000〜10000回転を段階的に）して象牙細管へ入れ、1日（24片）または3週（24片）育てた
・液：滅菌水（対照）、2%クロルヘキシジン、2%次亜、6%次亜。根管の壁にあたる面に50μLを滴下し、10分と30分の群では5分ごとに新しい液を50μL足した。時間は3分・10分・30分
・群：菌の育成期間（1日・3週）と液ごとに、各6片を無作為に割り付けた（時間ごとの片数は原著に記載が無い）
・測り方：液を当てたあと、片を根管に沿って割り、新しく出た割断面の象牙細管を、生きた菌は緑・膜の壊れた菌は赤に染める試薬で染め、共焦点レーザー顕微鏡で各面5か所を立体で撮影した。死んだ菌の割合＝赤の体積÷（緑＋赤）の体積
・統計：一変量の分散分析と事後の多重比較（p＜0.05）

④結果1：どの時間でも、6%次亜で死んだ菌の割合が最も高かった

原著の表1を、全てのセルそのまま（平均±標準偏差と有意差の記号）表にしました。

同じ値を、菌を育てた期間ごとに棒グラフにすると、液の差と時間の差がひと目で分かります。

6%次亜は、3分・10分・30分のどれでも、ほかの液より有意に多くの菌を死なせました（著者らの記載では53〜88%）。2%次亜（26〜71%）と2%クロルヘキシジン（24〜68%）の間には有意差を認めませんでした。滅菌水の対照では、死んだ菌は2〜5%でした。

菌の層の育ち具合でも差が出ました。3週育てた菌は、1日の菌より死んだ割合が少なく、消毒液の群はどれも有意でした（1日の菌34〜88%、3週の菌24〜78%）。著者らは、育った菌の層では、菌が作る基質の壁や、生きているが培養では育たない状態の菌、薬に強い一部の菌（パーシスター）が抵抗の強さにつながると考察しています。

⑤結果2：最初の3分が最も速く、10分を過ぎると上乗せはわずか

どの消毒液でも、死んだ菌の割合は3分より10分・30分で有意に多くなりました。ただし、増え方は時間とともに鈍りました。著者らが計算した1分あたりの増え方は次のとおりです。

・0〜3分：1分あたり8%（2%クロルヘキシジン・3週の菌）〜21%（6%次亜・1日の菌）
・3〜10分：1分あたり2.7%（6%次亜・1日と3週の菌）〜4.3%（2%次亜・1日の菌）
・10〜30分：どの群も1分あたり0.4%を下回った

表1の有意差の記号を見ると、10分と30分の差は、どの液・どちらの菌でも同じ文字を共有しており、有意ではありませんでした（筆者が表1の記号から読んだ。たとえば6%次亜の1日の菌は82%〈ij〉と88%〈j〉）。液は5分ごとに新しくしていたので、著者らは、効き方が鈍ったのは液が弱ったためとは説明できないとし、液が象牙質の奥まで届きにくいこと、象牙質や菌の塊で液が働きを失うこと、薬に強い一部の菌の存在を理由に挙げています（いずれも著者らの推測で、この研究では確かめていない）。

⑥結果3：濃度を上げることと、時間を延ばすこと

表1の記号でもう1つ読めることがあります。6%次亜の3分と、2%次亜の10分は、1日の菌でも3週の菌でも同じ記号を共有していました（1日の菌 63%〈efg〉と65%〈efg〉、3週の菌 53%〈d〉と52%〈d〉）。これは筆者が表1の記号から読んだもので、著者ら自身はこの組み合わせに触れていません。また、有意差を検出しなかったというだけで、同じ効果だと示されたわけではありません。

それでも、この実験の型の中では「濃度を上げる」と「時間を延ばす」が、死んだ菌の割合に対して似た向きに働いていたことは読み取れます。

⑦著者らの結論と、結果の読み方

著者らは、①象牙質の中の菌が死ぬ割合は当てる時間に左右される、②ただし最初の10分を過ぎると上乗せはわずか、③濃い次亜（6%）は2%クロルヘキシジンと2%次亜より効いた、④6%次亜を30分くり返し当てても象牙細管の菌は全部は死ななかった、と結論しています。あわせて、濃い次亜に長く浸すと象牙質の弾性や曲げ強さが下がりうるという別の研究を引き、殺菌の力と象牙質への影響の兼ね合いが大事だと述べています。

読み方として大事なのは、これは割った象牙質片の上に液を滴下した実験室の結果だという点です。器具で削りながら液を流す根管の中の洗浄とは、液の届き方も入れ替わり方も違います。また、「死んだ菌」は膜の壊れた菌を赤く染めて数えたもので、著者ら自身、傷んだだけで生きている菌が赤く数えられる可能性を認めています。

⑧明日の臨床へ

この研究から持ち帰れるのは、次のような読み方です（筆者の読み）。

なお、この研究の3分・10分・30分は、割った象牙質の上に液を置いた時間です。根管の中で液を当てる時間の目安として、そのまま数字を持ちこむことはできません。